In cadrul acestei etape de realizare a proiectului SINERGEM au fost elaborate:

•        Metode experimentale de izolare si purificare a polifenolilor si polizaharidelor din reziduuri (pomace) de fructe de pădure si din seminţe de chia.

Ø     Pentru extracţia polifenolilor au fost selectate pentru experimentele din etapele ulterioare metoda de extracţie in solvenţi alcoolici (etanol) asistata de microunde si metoda de extracţie enzimatica (cu feruloyl-esteraza), urmând sa se compare aceste metode din punct de vedere al randamentului de extracţie si al raportului cost – eficienta;

Ø     Extracţia polizaharidelor se realizează prin macerare in apa urmata de extracţia asistata de microunde;

Ø     Polifenolii totali se determina cantitativ prin metoda colorimetrica cu reactiv Folin-Ciocalteu, iar flavonoidele totale – prin metoda cu clorura de aluminiu;

Ø     Pentru caracterizarea activităţii polifenolilor extraşi se vor utiliza următoarele metode experimentale: determinarea activităţii antioxidante prin metoda TEAC si DPPH; determinarea efectului anti-inflamator; determinarea activităţii antimicrobiene;

Ø     Pentru caracterizarea activităţii polizaharidelor extrase se vor utiliza următoarele metode experimentale: determinarea capacitaţii antioxidante; determinarea inhibării α-amilazei.

•        Metode experimentale de caracterizare a surselor de polifenoli si polizaharide

Ø     Sursele de polifenoli se caracterizează prin analiza culorii lor, prin modul de prelucrare la care au fost supuse, prin cantitatea de polifenoli care se poate extrage prin metode uzuale si prin tipurile de polifenoli din sursa respectiva;

Ø     Sursele de polizaharide se caracterizează după conţinutul lor in amidon si in celuloza.

•        Metode experimentale de caracterizarea activităţii prebiotice a polizaharidelor si de evidenţiere a amplificarii acestei activităţi de către polifenoli

Ø     Efectul sinergic al combinației de polifenoli și polizaharide se determina pe 2 tulpini standard de lactobacili. Combinația sinergică cu efect prebiotic, selectată prin tehnici de screening molecular și celular, este testată in vitro la diferite concentrații.

Ø     Modelul experimental dezvoltat permite selectarea combinației prebiotice optime de polizaharide-polifenoli cu efecte sinergice superioare sumei efectelor obținute prin utilizarea individuală a compușilor naturali.